拒绝掺假的利器—DNA分子鉴别

目前我国的药材以植物类居多，因为植物干品能继续保留鲜活状态下的组织结构，鉴定多以外观性状和显微判断为主，化学鉴定为辅，DNA条码鉴定受成本和复杂度过高的影响应用很少，但对于部分易混淆的品种使用DNA鉴定能够更好的进行甄别，更好的为产品质量把关。整体来说适用DNA分子标记筛选应用的品种多在以下几个方面：

1. 外形易混淆的贵细药材，如川贝母，重楼

2. 干品肌肉、蛋白质和骨骼组织外观难以辨认的动物类药材，如蛇类，龟鳖甲类，海产类，贝壳类，鹿茸器官类，虫体。

应用时，需要注意的是

(1) 因为目前物种分类学是基于形态分类学的，所以每个物种存在种内变异，所以需要大量的取样，药典要求大于20个，确认阀值区间，建立适应性方法。

(2) 甲壳骨骼类DNA丰度非常低，样品要多并且无寄生虫。

(3) 药材多为干样品，制作参比和检测时候最好是鲜样，保证DNA的完整。

(4) 在土壤中的药材样品多有真菌过生污染，是检测中的外源核酸干扰源，需要处理，或取其他较洁净部位。

本文整理在实际应用中有DNA分子鉴定需求的一些品种，在此分享。

附录 9107中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则中的片段解释

依据： 《中国药典》2015年版四部 通则 分类：9000 指导原则 页码：第 383 页

① ITS2：ITS(internal transcribed spacer of nuclear ribosomal DNA)为内部转录间隔区，是核糖体RNA(rRNA )基因非转录区的一部分。ITS位于18S rRNA基因和28S rRNA基因之间，中部被5.8S rRNA基因一分为二，即ITS1(the first internal transcribed spacer)区和ITS2(the second internal transcribed spacer)区。5.8S、18S和28S进化速率较慢，常用于探讨科级和科级以上等级的系统发育问题。而间隔区ITS(包括ITS1和ITS2)进化速率较快，一般用于研究属间、种间甚至居群间等较低分类等级的系统关系。

② psbA-trnH：psbA-trnH基因间区是位于叶绿体psbA基因和trnH基因之间的一段非编码区，该间区进化速率较快，常用于植物属间、种间的系统发育研究。

③ COI：COI为线粒体基因组的蛋白质编码基因，全称为细胞色素C氧化酶亚基I(cytochrome C oxidase subimit I)，由于该基因进化速率较快，常用于分析亲缘关系密切的种、亚种及地理种群之间的系统关系。

（撰稿人：张岳峰 责任编辑：郑敦煌）

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